蛋白质鉴定是一个非常广泛的研究领域,它包含了广泛的分析方法和技术。尽管生物化学家在蛋白质分析方面取得了巨大的进步,但鉴定和纯化新蛋白质的过程仍然是一项艰巨的任务。乐动体育赞助企业这主要是因为对于聚集状态、电荷、大小、结构等有根本不同的大分子,缺乏一种通用的解决方案。
蛋白质特性的广度和复杂性源于似乎无限的蛋白质表达途径。想想看:所有的蛋白质都是由相同的21个不同浓度的氨基酸残基组成的链,这些氨基酸残基可能以无穷无尽的排列方式聚集在一起。然后,它们可以折叠成三维(3D)结构,进一步改变大小。使蛋白质表征过程更加复杂的是,它们从来不是孤立存在的。一个细胞可能含有多达10000种不同的蛋白质。
那么,生物化学家是如何开始进行蛋白质分析和表征的呢?乐动体育赞助企业
纯化蛋白质
为了准确地描述一种蛋白质的特性,化学家必须首先通过纯化将其从样品中分离出来,并通过许多定义特征对其进行鉴别。如前所述,生物化学家使用广泛的分析方法——从常规方法到实验方法——来进行蛋白质鉴定。
当样品被选择和分离时,获得用于分析的蛋白质就开始了。例如,细胞可以被溶解,所需的样品材料通过差速离心提取,在差速离心中,从较大的样品碎片中分离出越来越纯净的上清。即使经过多次离心,上清液也可能含有数千种不同的蛋白质。
通过将样品置于基于固有的化学、电或物理特性的分离方法来纯化感兴趣的蛋白质。色谱(亲和、离子交换、凝胶过滤、高效液相色谱等)是蛋白质纯化中最常用的技术之一,因为它允许基于各种特征特性的样品材料的高度选择性分离。
识别蛋白质
一旦获得了高纯度的蛋白质,生物化学家就可以开始对其组成、结构、分子量、纯度/杂质等进行表征。这些目标通常是相互关联的,最好按照特定的顺序来完成。例如,蛋白质链的分子量是根据氨基酸组成来预测的,氨基酸组成是通过化学方法确定的。
为了用化学方法精确地确定蛋白质的氨基酸序列,它的肽链被几种可能的方法之一切割,如胰蛋白酶消化,残基被顺序地从蛋白质链上切割,并通过高压液相色谱(HPLC)和质谱鉴定。这是化学上最常用的鉴定单个蛋白质序列的方法。
这只是一个关于蛋白质是如何被识别的以及我们如何了解它们的化学结构的例子。其他的例子包括:
- 分子量;
- Aaggregation状态;
- 光谱特征;
- 纯度/杂质;
- Homo和异质性;
- 消光系数(摩尔吸收率)。
- 蛋白修饰(糖基化、聚乙二醇化等)
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