在溶液中分析蛋白质特性和测定蛋白质纯度最常用的方法之一是观察样品对紫外线波长的吸收。含有适当氨基酸的蛋白质对紫外光谱上的光有吸收作用,尤其是峰值波长为260 - 280纳米的光。这使得分析各种蛋白质特性和测量相对于标准的浓度或使用预定义的消光系数变得容易。
在这篇博客文章中,Jordi实验室将专乐动体育登录注于使用紫外吸收光谱作为一种确定蛋白质特性的方法。
成像蛋白的紫外吸收特性
两种氨基酸是蛋白质吸收紫外线的主要原因:色氨酸和酪氨酸。每一种都显示了280nm波长下的摩尔吸收系数,但蛋白质本身的吸光度峰值很大程度上取决于这些特定氨基酸在线性链中的浓度和排列。蛋白质的最小和最大紫外线吸收度随氨基酸组成的变化而变化。这提供了一种初步的方法来测量已知蛋白质的纯度和蛋白质混合物或未知样品中的氨基酸浓度。
测定溶液中蛋白质含量最简单的方法是用分光计直接测定紫外吸收度。样品暴露在波长为260 - 280m的紫外光下,并测量其吸收程度。这种技术是快速和简单测量含有色氨酸和酪氨酸芳香链的纯蛋白质的理想方法。
这种技术不适合分析不含色氨酸和酪氨酸的样品的蛋白质特性。通常,205nm的峰值波长被用来用紫外-可见光谱法对这种难处理的样品进行光谱分析。
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