蛋白质浓度是影响治疗效果的关键参数。准确的量化提供关键信息支持配方研究和酶动力学的测定。在制备商业药物方面,定量对于各种下游应用至关重要。通常应用于确定蛋白质浓度的几种方法包括UV吸收,Bradford测定和二碳醌酸(BCA)测定。其中,由于其相对高精度,低成本和短分析时间,紫外线吸收被广泛应用。
对于UV吸收,基于使用已知的蛋白质消光系数(啤酒法)在特征波长下的UV吸光度测量来确定蛋白质浓度。蛋白质的强紫外光吸收是由于氨基酸中的芳族侧链,如酪氨酸,色氨酸和半胱氨酸。吸光度测量通常在280nm处进行,以减少蛋白质溶液中其他化合物的干扰。根据啤酒的法律,摩尔消灭系数(m-1厘米-1)对于溶解在给定溶液中并在给定波长测量的给定物质的常数是恒定的。对于蛋白质,百分比溶液消光系数(G / 100ml)-1厘米-1用于方便而不是摩尔消光系数。蛋白质的溶液消光系数是可以通过使用商业标准的校准来确定的关键参数,基于蛋白质的化学性质,或者可以从诸如NIST提供的数据库中获得。
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