蛋白质浓度是影响治疗效果的一个关键参数。准确的定量为配方研究和酶动力学的测定提供了关键信息。定量对于商业药物制备中的各种下游应用是至关重要的。几种常用的测定蛋白质浓度的方法包括紫外吸收法、Bradford法和bicincininic acid (BCA)法。其中,紫外吸收法因其相对精度高、成本低、分析时间短而被广泛应用。
对于紫外吸收,蛋白质浓度是根据已知的蛋白质消光系数(比尔定律),在特征波长处测量紫外吸收来确定的。蛋白质的强紫外光吸收是由于氨基酸中存在芳香侧链,如酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸。吸光度测量通常在280 nm处进行,以减少蛋白质溶液中其他化合物的干扰。根据比尔定律,摩尔消光系数(M-1厘米-1)是一个常数,对于溶解在给定溶液中的给定物质,并在给定波长下测量。蛋白质:溶液消光系数百分比(g/100mL)-1厘米-1用来代替摩尔消光系数。蛋白质的溶液消光系数百分比是一个关键参数,它可以通过商业标准校准来确定,根据蛋白质的化学性质估计,或者可以从NIST提供的数据库中获得。
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